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博士生預答辯報告公示-曹菲 201411210105

發布時間:2019-08-29 16:34:23 瀏覽量:105

報告題目:維甲酸誘導心肌致密化不全的基礎研究

報告簡介:

本課題研究了維甲酸 (retinoic acid,RA)誘導心肌致密化不全(non-compaction of ventricular myocardium,NVM)的基礎研究方面的一些基本問題,包括探討如何運用維甲酸誘導心肌致密化不全建立小鼠模型彩8彩票|手机app下载。在成功建立NVM小鼠模型后,運用TMT標記定量蛋白質組學檢測NVM心臟組織相關蛋白,以及運用靶向PRM蛋白質絕對定量對NVM差異蛋白驗證,進而發現一些潛在的與NVM相關蛋白,為后續的蛋白功能驗證、探索NVM相關發病機制及靶向治療的可能性提供了基礎研究平臺彩8彩票|手机app下载。

首先根據先前關于精確濃度RA與正常胚胎心肌致密化發育過程密切相關的研究報告,提出了采用腹腔灌注過量全反式維甲酸(ATRA)干擾孕鼠胚胎心肌致密化過程,從而誘導出生后幼鼠建立NVM模型的設想彩8彩票|手机app下载。其方法如下:將孕鼠分為3組:空白對照組、DMSO對照組和RA干預組。妊娠后8.5天給予溶解于DMSO 70 mg/kg ATRA誘導RA干預組小鼠胚胎致密化不全,建立NVM模型。孕鼠分娩后即處死的新生小鼠,獲取幼鼠心臟石蠟包埋并垂直于心臟長軸,以心臟短軸為切面,從心尖開始進行病理切片。HE染色在40倍和100倍放大下觀察心尖、瓣膜前及瓣膜水平等不同切面的病理變化。典型的NVM病理診斷標準為:心肌由兩層增厚的心室心肌壁組成:分別為薄而致密的心外膜層和具有數個顯著突出肌小梁和深凹的隱窩與心室相通而形成極厚的心內膜層,且非致密層(N)與致密心肌層(C)的厚度比N/C>1.4。采用單因素方差分析(ANOVA)和兩組最小顯著性差異(LSD)多重比較分析三組的差異,P值<0.05為顯著。顯微鏡下組織病理學觀察顯示:與空白對照組(n=20)和DMSO對照組(n=15)相比,RA干預組(n=17)孕鼠子代表現出典型的NVM組織病理學特征:均表現出明顯薄弱的致密層和較厚的非致密層彩8彩票|手机app下载。ATRA干預后組左心室N/C比值為2.735±1.634,顯著高于DMSO對照組0.178±0.119和空白對照組0.195±0.118彩8彩票|手机app下载,差異有統計學意義(F=32.550彩8彩票|手机app下载彩8彩票|手机app下载,P值<0.0001);RA干預后組右心室N/C比值為(6.068±4.394),也顯著高于DMSO對照組為0.459±0.24,空白對照組為0.248±0.182,有顯著性差異(F=20.069,p <0.0001)。左右心室的N/C比值在LSD兩組間多重比較顯示RA干擾組與空白對照組(P<0.0001)、RA干擾組與DMSO對照組(P<0.0001)之間均有有顯著性差異彩8彩票|手机app下载??瞻讓φ战M與DMSO對照組的N/C比值分別在左室(P=0.963)和右室(P=0.848)均無顯著性差異。結論:過量的ATRA可誘導胎鼠心臟NVM彩8彩票|手机app下载。該動物模型可為下一步TMT標記定量蛋白質組學NVM心臟組織檢測奠定基礎。

隨后在RA導孕鼠子代心肌發生非致密化建立NVM幼鼠模型后,我們運用TMT標記定量蛋白質組學技術開展RA誘導NVM的基礎研究,在Mus musculus (mouse)中共鑒定到蛋白質5444個。按照表達倍數變化 1.2 倍以上(上調大于 1.2 倍或者下調小于 0.83 倍)且 P value<0.05 的標準篩選差異表達蛋白質。其中,RA_vs_Control組的上調差異表達蛋白質有38個彩8彩票|手机app下载,下調差異表達蛋白質30個,總調節差異蛋白68個;RA_vs_DMSO組的上調差異表達蛋白質有23個彩8彩票|手机app下载,下調差異表達蛋白質25個彩8彩票|手机app下载,總調節差異蛋白48個;經過 GO 功能和 KEGG 通路分析發現,這些差異表達蛋白質的功能主要是blood coagulation、fibrin clot formation,negative regulation of hemostasis,negative regulation of coagulation,negative regulation of blood coagulation,protein activation cascade,regulation of heterotypic cell?cell adhesion,fibrinolysis,negative regulation of cell adhesion molecule production等重要生物學過程,trivalent inorganic cation transmembrane transporter activity,ferric iron transmembrane transporter activity彩8彩票|手机app下载,brain?derived neurotrophic factor binding,neurotrophin binding,iron ion transmembrane transporter activity,growth factor binding等分子功能,cell surface,extracellular space彩8彩票|手机app下载,extracellular region,extracellular region part,external side of plasma membrane,HFE?transferrin receptor complex等定位蛋白質,發生了顯著性變化。該蛋白組學檢測可為下一步靶向PRM蛋白質絕對定量對NVM差異蛋白驗證奠定基礎彩8彩票|手机app下载。

最后在TMT標記定量蛋白質組學檢測NVM心臟組織檢測結構分析之后彩8彩票|手机app下载,運用靶向PRM蛋白質絕對定量對NVM差異蛋白驗證。經過預實驗和正式實驗后對分別對Control、DMSO以及RA三組9例幼鼠心臟樣品中O08677、P55088、Q00623、Q00898彩8彩票|手机app下载、Q01339及Q9D6F9 6種目標蛋白的12條肽段進行LC-PRM/MS定量分析,采用同位素重標肽段對定量信息進行歸一化校正,進而對目標肽段和目標蛋白進行相對定量分析。分析結果表明:在3種不同條件下,6種目標蛋白的表達量存在一定的差異。這為后續的NVM相關蛋白功能驗證,了解NVM相關發病機制及靶向治療提供了基礎研究平臺彩8彩票|手机app下载。

答辯評委:饒莉,楊正林彩8彩票|手机app下载,劉貽堯,蔣黎彩8彩票|手机app下载,尹立雪

報告人:曹菲 2014級博士 201411210105

報告時間:2019年9月3日

報告地點:四川省醫學科學院·四川省人民醫院心超科

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